Noções básicas sobre o microscópio óptico

O microscópio é um instrumento óptico complexo, composto de peças ou lentes mecânicas e ópticas, e cujo objetivo principal é poder visualizar microorganismos e estruturas não visíveis a olho nu. Anton Van Leeuwenhoeck (1632-1723) é o pai da microscopia moderna, desenvolveu o microscópio de luz que conhecemos hoje e foi o primeiro cientista a observar bactérias, protozoários, espermatozóides e tecidos celulares.

Em um microscópio óptico, distinguimos diferentes partes, que podem ser classificadas de acordo com as partes ou sistema óptico e partes ou sistema mecânico.

O sistema óptico:

Ele é responsável por formar e aumentar a imagem que queremos observar. O sistema de lentes e tubos captura e direciona o feixe de luz para o olho humano.

Olho humano: o feixe de luz que sai do microscópio é focado na lente e na retina do olho.

Ocular: Lente que captura e amplia a imagem formada nas lentes. É a parte do microscópio mais próxima do olho humano. Existem microscópios monoculares, binoculares e trinoculares.

Objetivo (s): A lente localizada no revólver, captura a imagem no slide e aumenta a imagem de acordo com a ampliação de cada objetivo (10,40, 60, 100x) e depois a transmite para a ocular.

Condensador: lente que condensa os raios de luz e os projeta na preparação.

Diafragma: regula a quantidade (intensidade) de luz que entra no condensador.

Foco: direciona os raios de luz para o condensador.

O sistema mecânico:

É aquele que dá suporte, movimento e foco à amostra que queremos observar.

Tubo: é a câmera escura que carrega a ocular e as objetivas. Pode ser anexado ao braço para permitir foco

Revólver: é a peça que carrega os diferentes objetivos. Possui um movimento rotativo para poder escolher qual objetivo e ampliação queremos para observação.

Parafuso de métrica macro: move o palco para cima e para baixo para ampliar ou reduzir a amostra do alvo para focalizar a preparação.

Parafuso micro métrico: é o sistema de foco fino do microscópio, serve para focar com precisão a preparação.

Etapa: É a plataforma horizontal onde colocamos a preparação. Geralmente, possui uma pinça para reter a amostra. A retenção da amostra pode ser fixa ou móvel nos eixos X e Y (estágio mecânico).

Braço: é a estrutura que segura o tubo, o palco e os parafusos de foco.

Pé: é a parte inferior do microscópio, que serve como superfície de suporte. Isso nos dá estabilidade.

Imagem das partes de um microscópio óptico (clique para visualizar)

A ampliação total ou máxima de um microscópio será obtida multiplicando a ampliação da objetiva pela ampliação da ocular, por exemplo:

Objetiva 40X x Ocular 10X = 400X

O aumento de objetivos é variável e podemos encontrar objetivos de:

4X, 10X, 20X, 40X, 60X e 100X

A ampliação da ocular é sempre mais limitada e as mais comuns são as oculares WF entre 10 e 15X.

Observar uma amostra padrão ou um corte fino valerá a pena com objetivos entre 4 e 40X. Com esses aumentos, poderemos ver cortes de folhas, caules, tecidos e estruturas celulares, como protozoários, amebas, bactérias, pólen etc.

As objetivas de 60 a 100X são objetivas de alta ampliação para observação celular com mais detalhes; nesses casos, a distância de trabalho é bastante reduzida e é necessário o uso de óleo de imersão para aumentar o poder de resolução e não danificar a óptica da lente. Usaremos esses aumentos se quisermos observar as células em detalhes dentro delas (estrutura celular).

Outra característica óptica a ser levada em consideração será o poder da resolução ou a capacidade de distinguir dois pontos ou objetos muito próximos. Em microscopia, há uma capacidade mínima de resolução de 0,2 micrômetros.

Finalmente, o poder de correção das aberrações ópticas que aparecem na observação é elementar. Existem vários tipos de lentes, dependendo do seu tratamento óptico:

Acromático: Com correção no campo verde e amarelo.

Platocromático: acromático com boa correção da curvatura do campo visual, as bordas parecem focadas.

Apocromats: Corrija todos os erros de cores

Planos apocromáticos: Corrigir erros de cor e curvatura

Partes e características de um alvo (clique para visualizar)

Exemplo de corte ou corte de um caule de milho (clique para ver)

Existem muitas variedades de microscópios, dependendo de seu uso. Além do simples microscópio óptico, a tecnologia durante os séculos XX e XXI desenvolveu um número infinito de aplicações para observar diferentes tipos de materiais, células e tecidos. A microscopia tem e tem desempenhado um papel fundamental no avanço da biomedicina e, neste campo, em particular, os maiores avanços em técnicas como fluorescência e contraste de fase foram desenvolvidos.

Finalmente, o desenvolvimento de microscópios eletrônicos a partir de 1937 e agora os microscópios digitais completaram e sofisticaram o mundo da observação celular.

Atualmente, encontramos todos esses tipos de microscópios:

• Microscópio óptico
  
• Microscópio simples
  
• Microscópio invertido
• Microscópio de luz ultravioleta
  
• Microscópio de fluorescência
  
• Microscópio petrográfico
  
• Microscópio de campo escuro
  
• Microscópio de contraste de fase
  
• Microscópio de luz polarizada
  
• Microscópio confocal
  
• Microscópio eletrônico
  
• Microscópio eletrônico de transmissão
  
• Microscópio eletrônico de varredura
  
• Microscópio de íons de campo
  
• Microscópio de varredura
  
• Microscópio de efeito túnel
  
• Microscópio de força atômica
  
• Microscópio virtual
  

Um último tipo de microscópio a destacar e de uso especial são os estereomicroscópios ou lupas binoculares. Este instrumento, com uma ampliação menor do que um microscópio biológico (10-40X), pode ser binocular ou trinocular (adaptar uma câmera) e seu uso é focado na observação de elementos vivos ou mortos maiores. Com ele, insetos, fungos, plantas, musgos, líquenes etc. são observados e identificados, além de serem utilizados para analisar materiais industriais, de construção ou eletrônicos.