Técnicas de observação em microscopia

A observação de campo claro é a técnica mais simples de microscopia. Neste sistema, a luz passa através ou é refletida pela amostra, sem qualquer alteração, além daquela causada pela própria amostra.

Toda a luz da amostra e do ambiente é coletada pela lente para formar uma imagem contra um fundo totalmente brilhante. Este tipo de observação é o mais adequado para amostras coradas ou com pigmentos naturais e com alto contraste.

É amplamente utilizado em patologia e histologia de plantas e animais; para a observação de seções de tecidos finos, a amostra contrastada aparece sob um fundo brilhante. No entanto, não é muito útil para a observação de células vivas.

A técnica de observação de campo escuro é uma técnica de contraste, sem luz direta, onde apenas a luz difratada da amostra é usada para formar a imagem.

Nesta técnica, as amostras devem ser transparentes e não manchadas. A luz da amostra deve ser controlada para que a luz central seja bloqueada. A iluminação (graças ao condensador) forma um cone oco, com apenas luz oblíqua, que reflete na amostra e nos arredores. A imagem é formada por raios de luz espalhados pelo espécime e pelo estágio, que são capturados pelo alvo.

É uma técnica adequada para observar células e organismos vivos. Isto é assim, porque o contraste é criado por um organismo brilhante em um fundo escuro, assim, revelamos fundos, bordas e contornos do organismo. Um dos principais usos é na hematologia, nas células vivas do sangue.

A técnica de contraste de fase também corresponde a uma técnica de observação de contraste, independentemente da redundância. Isso significa que o resultado da imagem será o fruto da passagem da luz através da amostra, normalmente viva, e os diferentes índices de refração que resultam disso.

A luz de uma lâmpada / lâmpada de halogênio-tungstênio é direcionada através de uma lente coletora e focada em anéis condensadores especializados. As frentes de onda que passam pelo anel iluminam a amostra e passam diretamente (ou difratadas) pela amostra e são atrasadas pelos gradientes de fase da amostra. A luz não direcionada, difratada e coletada pela lente, é separada por uma placa de fase e focada no plano intermediário da imagem para formar a imagem final.

Esta técnica é usada na observação de células vivas ou no estudo de materiais com folhas muito finas.

O microscópio de fluorescência é baseado no qual os objetos são iluminados por raios de um determinado comprimento de onda. A imagem observada é o resultado da radiação eletromagnética emitida por moléculas que absorveram a radiação primária e reemitiram a luz com um comprimento de onda mais longo. Quero dizer, eles ficaram animados. Para passar apenas a emissão secundária desejada, filtros apropriados devem ser colocados abaixo do condensador e acima do alvo.

Assim, poderíamos determinar essa técnica de observação como indireta, uma vez que a observação ou resultado é graças à reação de certas moléculas ou células em um primeiro tipo de luz ou radiação que elas absorveram.

A microscopia de fluorescência é usada para detectar certas substâncias, como vitamina A ou substâncias marcadas com fluorocromo. Também permite determinar a distribuição de uma única espécie de molécula, sua quantidade e localização dentro da célula. É uma técnica muito específica e evoluída, mas ao mesmo tempo amplamente utilizada na análise biomolecular.